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目的 探讨转染维A酸受体α(RARα)在肾小管上皮细胞(NRK-52E细胞)缺氧损伤后转分化中的作用.方法 构建过表达RARa慢病毒载体和阴性病毒载体,将NRK-52E细胞分为4组:正常对照组、缺氧模型组、转染组、阴性病毒对照组.转染组、阴性病毒对照组基因干扰72 h后,用2 mg/L嘌呤霉素筛选,再进行缺氧处理.正常对照组不做任何处理.缺氧48 h后采用光镜观察细胞形态变化,采用实时荧光定量PCR法和Western blot法检测NRK-52E细胞的RARα、E-钙黏蛋白(E-cadherin)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的mRNA和蛋白表达.结果 1.光镜下缺氧模型组与阴性病毒对照组NRK-52E细胞均出现萎缩,呈长梭型,类似成纤维细胞形态改变;而转染组NRK-52E细胞萎缩不明显,细胞呈多方形,保留上皮细胞形态.2.与正常对照组比较,缺氧模型组 NRK-52E细胞 RARα、E-cadherin的 mRNA和蛋白表达均显著降低(mRNA:0.58 ± 0.12比1.00 ± 0.00,0.11 ± 0.00比1.00 ± 0.00,t= -0.63、767.30,均P<0.05;蛋白:0.63 ± 0.12比1.62 ± 0.16, 0.44 ± 0.22比1.27 ± 0.08,t=8.61、6.19,均P<0.05),而α-SMA的mRNA和蛋白表达均显著升高(3.47 ± 0.83比1.00 ± 0.00,1.39 ± 0.16比0.64 ± 0.10,t= -5.01、-6.91,均P<0.05).3.缺氧干预后,转染组NRK-52E细胞RARα和 E-cadher

作者:龚玲;蒋玲;覃远汉;江星伯;宋坤岭;余雪云

来源:中华实用儿科临床杂志 2018 年 33卷 5期

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作者:
龚玲;蒋玲;覃远汉;江星伯;宋坤岭;余雪云
来源:
中华实用儿科临床杂志 2018 年 33卷 5期
标签:
维A酸受体α 肾小管上皮细胞 转分化 转染 缺氧 Retinoic acid receptor α Renal tubular epithelial cells Epithelial-to-mesenchymal transition Transfection Hypoxia
目的 探讨转染维A酸受体α(RARα)在肾小管上皮细胞(NRK-52E细胞)缺氧损伤后转分化中的作用.方法 构建过表达RARa慢病毒载体和阴性病毒载体,将NRK-52E细胞分为4组:正常对照组、缺氧模型组、转染组、阴性病毒对照组.转染组、阴性病毒对照组基因干扰72 h后,用2 mg/L嘌呤霉素筛选,再进行缺氧处理.正常对照组不做任何处理.缺氧48 h后采用光镜观察细胞形态变化,采用实时荧光定量PCR法和Western blot法检测NRK-52E细胞的RARα、E-钙黏蛋白(E-cadherin)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的mRNA和蛋白表达.结果 1.光镜下缺氧模型组与阴性病毒对照组NRK-52E细胞均出现萎缩,呈长梭型,类似成纤维细胞形态改变;而转染组NRK-52E细胞萎缩不明显,细胞呈多方形,保留上皮细胞形态.2.与正常对照组比较,缺氧模型组 NRK-52E细胞 RARα、E-cadherin的 mRNA和蛋白表达均显著降低(mRNA:0.58 ± 0.12比1.00 ± 0.00,0.11 ± 0.00比1.00 ± 0.00,t= -0.63、767.30,均P<0.05;蛋白:0.63 ± 0.12比1.62 ± 0.16, 0.44 ± 0.22比1.27 ± 0.08,t=8.61、6.19,均P<0.05),而α-SMA的mRNA和蛋白表达均显著升高(3.47 ± 0.83比1.00 ± 0.00,1.39 ± 0.16比0.64 ± 0.10,t= -5.01、-6.91,均P<0.05).3.缺氧干预后,转染组NRK-52E细胞RARα和 E-cadher