目的 体外构建人肝细胞核因子4α(HNF4α)基因真核表达载体,并初步鉴定其在HepG2细胞的表达.方法 从肝癌手术患者获得肝组织,分离得到肝组织总RNA,将其逆转录合成cDNA,经特异性引物扩增HNF4α基因片段,将其定向连接到pcDNA3.1(+)真核表达载体,经抗生素筛选后,酶切及测序鉴定其序列正确.提取质粒,转染HepG2细胞,48 h后裂解细胞,应用抗HNF4 α行Western blot检测目的蛋白.结果 从临床肝癌患者肝组织中成功分离得到总RNA,扩增出HNF4α基因,经筛选、酶切鉴定和测序,确认pcDNA3.1-4α真核表达载体构建成功.在转染HepG2细胞48 h后,检测显示53 kDa位置有明显融合蛋白条带.结论 我们成功构建了HNF4 α基因真核表达载体,体外转染HepG2细胞成功表达HNF4α蛋白,为后续研究奠定了基础.
作者：丁宁；张明香
来源：实用肝脏病杂志 2016 年 19卷 2期
