目的:构建一种抑制Snail基因表达的腺相关病毒载体系统.方法:在GenBank中获取Snail基因的核苷酸序列,设计并合成2条Snail基因的shRNA,应用分子生物学方法将腺相关病毒(AAV)载体与shRNA(TUD)相结合,构建pAAV-U6-shRNA-Snail-TUD-EGFP表达质粒和pAAV-RC及pAAV-Helper质粒共转染至AVV-293细胞中,包装生成携带shSnail-TUD的重组腺相关病毒rAAV-U6-shRNA-Snail-TUD-EGFP.将重组病毒感染至口腔鳞癌细胞Tca8113和Cal-27中,实时定量PCR检测shSnail对细胞内Snail基因的沉默效果,并测定病毒感染滴度.结果:DNA测序证明构建的shRNA-Snail基因沉默子序列正确并成功克隆到腺病毒表达载体上;AAV-293细胞表达绿色荧光蛋白提示共转染成功.感染口腔鳞癌细胞Tca8113和Cal-27细胞后,能显著下调口腔鳞癌细胞Tca8113和Cal-27细胞内的Snail mRNA和蛋白的表达水平.重组AAV感染滴度为4.4×1010/ml.结论:包装的重组腺相关病毒rAAV-U6-shRNA-Snail-TUD-EGFP可抑制细胞Snail基因表达.
作者：李泽濛；郑根建；周岚；罗文；云蔓；李鹏程
来源：实用口腔医学杂志 2017 年 33卷 6期
