目的 设计合成对人乙酰肝素酶(heparanase,HPA)基因有特异性抑制作用的短发夹状RNA表达载体,筛选出对HPA沉默效果最佳的质粒.方法 根据GenBank数据库提供的人HPA基因核苷酸序列,按短发夹RNA设计原则设计4对特异性寡核苷酸序列及阴性对照,分别克隆到pYr-1.1质粒载体中.用脂质体转染入Hela细胞,分别采用RT-PCR与细胞免疫荧光分析其对HPA在mRNA和蛋白质水平上表达的影响.结果 经测序鉴定证实重组质粒构建成功；在构建的4个载体中,HPA-592组Hela细胞和Caski细胞HPA基因mRNA和蛋白质表达水平明显下降,对照组未发生明显改变.结论 成功筛选出靶向人HPA的shRNA表达载体,转染宫颈癌Hela细胞和Caski细胞后可高效抑制HPA基因表达.
作者：吕琼莹；张蔚；程静；张文婷；钟亚娟
来源：中华实用诊断与治疗杂志 2013 年 27卷 8期
