目的 构建含 PTEN 基因的重组腺病毒载体,为 PTEN 进行肺腺癌的基因治疗奠定基础.方法 用PTEN 引物 VT415 和 VT416 扩增 PTEN 基因后,分别用EcoR I+Sal I双酶切PCR-PTEN和PSUCMV,回收并纯化PTEN cDNA小片断和PSUCMV的大片断,使两者连接获得含有PTEN基因的重组穿梭质粒载体PSUCMV-PTEN;采用细胞内同源重组方法构建PTEN基因重组腺病毒载体,将质粒PSUCMV-PTEN与含有5型腺病毒右臂的质粒Pbghe3通过 Lipofectamine 2000共转染至293细胞,经PCR鉴定,扩增病毒,氯化铯密度梯度离心法纯化浓缩,测定病毒滴度.结果 经双酶切和PCR进行鉴定,经鉴定正确的腺病毒命名为VSUCMV-PTEN,TCID50法测定病毒滴度为1.0×1010pfu/ml.结论 成功构建了含PTEN基因的重组腺病毒载体Ad-PTEN,为下一步体内外实验证实PTEN对肺癌的抑制作用研究打下基础.
作者：徐中华；钱海鑫；钱永跃
来源：苏州大学学报（医学版） 2011 年 31卷 1期
