目的:克隆编码多药耐药基因-1(MDR1)中不同长度的启动子片段并探讨和比较其在乳腺癌细胞中的转录活性.方法:利用PCR扩增技术以MCF-7/ADR细胞基因组为模板克隆3种不同长度的启动子片段.pGL3-basic的启动区域中,构建一系列报告基因载体pGL3-MDR1Pn.以pGL3-control为阳性对照,分别将含不同长度的MDR1启动子的报告基因载体pGL3-MDR1Pn与pRL-TK以一定比例共转染到敏感的MCF-7细胞和耐阿霉素的MCF-7/ADR细胞,通过分析表达的荧光素酶的活性比较不同长度的启动子片段在这两种细胞中的转录活性.结果:酶切鉴定和测序验证了已将不同长度的MDR1启动子片段成功插入到荧光素酶报告基因载体pGL3-basic中,且克隆的片段中没有出现碱基突变.将表达载体转染细胞后活性检测结果显示,pGL3-MDR1P1、pGL3-MDR1P2和pGL3-MDR1 P3在MCF-7中活性分别为阳性对照的(13.03±2.35)％、(14.60±3.57)％和(10.27±1.89)％;而在MCF-7/ADR中活性分别为阳性对照的(105.26±6.84)％、(59.08±4.95)％和(62.39±5.76)％.结论:成功克隆了MDR1启动子片段,并成功构建了荧光素酶报告基因载体pGL3-MDR1P.启动子的活性分析结果初步表明长度约为2 000 bp的MDR1P1在MCF-7/ADR中具有相对较高的特异性.
作者：刘蕊
来源：天津医科大学学报 2017 年 23卷 1期
