目的:研究伯氏疟原虫输出蛋白——红细胞膜相关蛋白1(EMAP1)在疟原虫生长发育和侵染中的作用,构建EMAP1缺失的伯氏疟原虫突变体.方法:以pL0035质粒为载体,PCR扩增EMAP1编码区上游和下游序列作为同源臂,用酶切连接和无缝克隆的方法将两条同源臂分别插入pL0035,获得重组质粒pL0035-ΔPbEMAP1;利用疟原虫转染技术在伯氏疟原虫中敲除EMAP1,有限稀释法筛选EMAP1基因敲除的单克隆虫株,PCR和Southern印迹鉴定基因型;定制抗PbEMAP1多克隆抗体,利用Western印迹鉴定EMAP1缺失疟原虫.结果:(1)成功构建用于敲除PbEMAP1的重组质粒pL0035-ΔPbEMAP1.(2)获得能有效识别PbEMAP1蛋白的抗体.(3)基因型和蛋白水平鉴定重组疟原虫为PbEMAP1缺失的伯氏疟原虫单克隆虫株.结论:本研究构建的PbEMAP1缺失伯氏疟原虫突变体,为研究PbEMAP1在疟原虫发育和侵染中的作用提供了必要的工具.
作者：魏超；史小雨；王倩
来源：天津医科大学学报 2022 年 28卷 2期
