目的构建以结核分枝杆菌热休克蛋白65(HSP65)和汉坦病毒G2糖蛋白重组融合基因为基础的真核表达载体,为进一步研究其在结核病和出血热防治中的作用奠定基础.方法采用聚合酶链反应从结核分枝杆菌H37Rv株基因中,扩增出HSP65的编码基因,从T-H8205G2质粒扩增出G2糖蛋白的编码基因,经相应限制性核酸内切酶消化后,插入真核表达载体pcDNA3.1/His,并将此重组质粒通过脂质体介导转染NIH3T3细胞,用SDSPAGE、免疫组织化学及免疫荧光方法分别测定表达产物的相对分子量及特异性.结果获得正向插入的pcDNA3.1/His-HSP65-G2重组表达质粒,表达产物的相对分子量为105 kD,与理论预期大小一致,并且可与汉坦病毒H8205株的腹水抗体和HSP65单抗起特异反应.表明构建的pcDNA3.1/His-HSP65-G2能在哺乳动物细胞中表达并具有抗原性.结论编码HSP65和G2抗原基因的重组基因的真核表达载体构建成功.
作者：黄浩；黄汉菊
来源：华中科技大学学报（医学版） 2006 年 35卷 1期
