目的:建立突变型人白细胞介素-2(rhIL-2)基因大肠杆菌表达系统,为rhIL-2的生产及临床应用奠定基础.方法:自人胎盘组织中提取总RNA,逆转录PCR(RT-PCR)扩增突变型人IL-2基因cDNA,通过对下游引物的设计将编码125位半胱氨酸(C125)的密码子TGT更改为编码丝氨酸的密码子TCT.构建表达型重组质粒pBV-IL-2,温度诱导表达,表达产物行SDS-聚丙烯酰氨凝胶电泳(SDS-PAGE)及Western Blot鉴定.结果:DNA序列分析证实,重组质粒pBV-IL-2含有突变型人IL-2编码序列及正确的开放读码框架.SDS-PAGE显示,诱导表达碎菌后的沉淀中有分子质量大小约为16.5 ku的外源蛋白产生,经Western印迹(Western Blot)证明为rhIL-2.结论:成功构建了突变型人白细胞介素-2大肠杆菌表达系统,表达产物主要以包涵体的形式存在于碎菌后的沉淀中.
作者：左爱军；梁东春；刘新宇；郭刚；张镜宇
来源：天津医药 2005 年 33卷 11期
