目的探讨拟胚体（EBs）培养密度对小鼠胚胎干细胞（ESCs）心肌细胞分化的影响。方法小鼠ESCs经过悬滴培养后形成EBs后，以高、低密度（120、60个EBs/60 mm组织培养皿）贴壁培养，免疫荧光检测心肌特异性蛋白肌钙蛋白T(TnT)的表达。在不同时间点计算不同密度组搏动EBs百分比；RT-PCR检测Nkx2.5、GATA4、β-MHC及ANF基因表达水平；Western-blot检测TnT及p38表达水平。结果通过悬滴培养法形成的EBs能够出现自发性搏动并且有TnT表达。高密度培养组与低密度培养组相比具有更高的搏动EBs百分比，Nkx2.5、GATA4、β-MHC和ANF基因高表达水平，以及TnT蛋白高表达水平（P＜0.05）。高密度培养组的p38活性更高，使用p38特异性阻断剂SB203580能够降低高密度组搏动EBs百分比和TnT蛋白表达水平。结论 EBs贴壁培养密度是影响ESCs向心肌细胞分化的一个重要因素，EBs高密度培养相比于低密度培养能够获得更大程度的心肌分化，且该现象可能是由p38信号通路所介导。
作者：陈明；毕琳琳；赵芳；王智泉；干学东；王扬淦
来源：天津医药 2013 年 8期
