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目的 探究M2型巨噬细胞来源的外泌体(M2 Exos)对刀豆蛋白A(Con A)诱导的小鼠自身免疫性肝炎(AIH)的保护作用.方法 采用IL-4(20μg/L)刺激RAW264.7巨噬细胞24 h后提取M2 Exos并用透射电子显微镜、纳米颗粒跟踪分析技术和蛋白质免疫印迹对其进行鉴定;免疫荧光观察RAW264.7巨噬细胞对M2 Exos的摄取情况.将12只C57BL/6J小鼠随机分为PBS组、DiR-M0 Exos组、DiR-M2 Exos组和DiR染料对照组.Con A(15 mg/kg)注射完成1 h后通过尾静脉分组注射PBS溶液、DiR-M0 Exos(100μg)、DiR-M2 Exos(100μg)和DiR染料,活体成像技术观察Exos在AIH小鼠肝、脾、心、肺、肾、肠的分布情况.将20只C57BL/6J小鼠随机分为Control组(PBS溶液)、Con A组(15 mg/kg Con A),M0 Exos组(15 mg/kg Con A+200μg M0 Exos)和M2 Exos组(15 mg/kg Con A+200μg M2 Exos),每组5只.Con A注射完成12 h后处死小鼠,收集外周血和肝组织,全自动生化仪测定血清丙氨酸转氨酶(ALT)和天冬氨酸转氨酶(AST)水平;苏木精-伊红(HE)染色观察肝脏病理形态变化;实时荧光定量PCR(qPCR)检测肝组织肿瘤坏死因子(TNF)-α和白细胞介素(IL)-6的mRNA表达水平;流式细胞术检测肝脏巨噬细胞亚群变化情况.结果 成功诱导并分离了M2 Exos,可被RAW264.7巨噬细胞摄取;经尾静脉注射后,M

作者:张璐;陈黎薇;刘曼;张洁;周璐;赵经文;王邦茂

来源:天津医药 2021 年 49卷 9期

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作者:
张璐;陈黎薇;刘曼;张洁;周璐;赵经文;王邦茂
来源:
天津医药 2021 年 49卷 9期
标签:
肝炎,自身免疫性;巨噬细胞;外泌体;伴刀豆球蛋白A;RAW264.7细胞;小鼠,近交C57BL
目的 探究M2型巨噬细胞来源的外泌体(M2 Exos)对刀豆蛋白A(Con A)诱导的小鼠自身免疫性肝炎(AIH)的保护作用.方法 采用IL-4(20μg/L)刺激RAW264.7巨噬细胞24 h后提取M2 Exos并用透射电子显微镜、纳米颗粒跟踪分析技术和蛋白质免疫印迹对其进行鉴定;免疫荧光观察RAW264.7巨噬细胞对M2 Exos的摄取情况.将12只C57BL/6J小鼠随机分为PBS组、DiR-M0 Exos组、DiR-M2 Exos组和DiR染料对照组.Con A(15 mg/kg)注射完成1 h后通过尾静脉分组注射PBS溶液、DiR-M0 Exos(100μg)、DiR-M2 Exos(100μg)和DiR染料,活体成像技术观察Exos在AIH小鼠肝、脾、心、肺、肾、肠的分布情况.将20只C57BL/6J小鼠随机分为Control组(PBS溶液)、Con A组(15 mg/kg Con A),M0 Exos组(15 mg/kg Con A+200μg M0 Exos)和M2 Exos组(15 mg/kg Con A+200μg M2 Exos),每组5只.Con A注射完成12 h后处死小鼠,收集外周血和肝组织,全自动生化仪测定血清丙氨酸转氨酶(ALT)和天冬氨酸转氨酶(AST)水平;苏木精-伊红(HE)染色观察肝脏病理形态变化;实时荧光定量PCR(qPCR)检测肝组织肿瘤坏死因子(TNF)-α和白细胞介素(IL)-6的mRNA表达水平;流式细胞术检测肝脏巨噬细胞亚群变化情况.结果 成功诱导并分离了M2 Exos,可被RAW264.7巨噬细胞摄取;经尾静脉注射后,M