[目的]利用稳定同位素代谢标记(stable-isotope labeling by amino acids in cell culture,SILAC)技术完成心肌细胞内蛋白的完整标记,为研究心肌缺氧等高原性心肌损伤提供相对定量的标准.[方法]分别采用中度和重度SILAC培养基培养心肌H9c2细胞,培养基中赖氨酸和精氨酸浓度分别为0.798和0.398 mmol/L;中度标记培养基含有赖氨酸4,4,5,5-D4-Lysine(Lys4)和精氨酸13C6-Arginine (Arg6);重度标记培养基含有赖氨酸13C615N2-Lysine(Lys8)和精氨酸13C615N4-Arginine (Arg 10);通过连续培养6代后,提取细胞蛋白,采用过滤辅助蛋白组样本制备方法(Filter aided proteome preparation,FASP)联合12.5 μg/ml质谱级胰蛋白酶溶液分别消化两种不同标记策略的细胞蛋白,经脱盐后进行高效液相结合质谱检测.所得数据由蛋白组学搜索软件MaxQuant进行分析,高斯拟合正态分布计算标记效率,GO分析鉴定蛋白参与的细胞生物学进程.[结果]中度SILAC标记组鉴定621个蛋白,正态分布μ值为5.06,标记效率为97.1％;重度SILAC标记组鉴定966个蛋白,正态分布μ值为5.98,标记效率为98.4％.这些蛋白主要集中于翻译、糖酵解等生物学进程.[结论]成功实现两种SILAC条件下心肌细胞H9c2蛋白的完整代谢标记,为研究高原性心肌损伤提供了蛋白组学的定量标准

作者：张西南；张妍；徐忠伟；温晓昶；郭佳；邹爽

来源：武警后勤学院学报（医学版） 2020 年 29卷 2期