[目的]利用密码子优化技术,提高甘油脱氢酶基因gldA在大肠杆菌中的表达水平.[方法]针对gldA起始密码子下游区域,优先选择AT含量最高的同义密码子,从而在不改变氨基酸序列的前提下,提高该区域的AT含量.利用大引物PCR的方法对野生型gldA-WT进行定点突变,获得优化型基因gldA-4,与pET-32a(+)连接后,构建表达质粒pET-gldA-4,转入E.coli BL21(DE3),得到工程菌E.coli-4.同时,设定包含gldA-WT的工程菌E.coli-WT作为对照,摇瓶发酵后,以甘油为底物检测比较表达产物的酶活力.[结果]gldA_4相对gldA-WT而言,改变了第2、5、6位密码子中的4个碱基,AT含量从53.3
作者：唐龙盘；余劲聪；戴丹凤；方柏山
来源：微生物学报 2011 年 51卷 4期
