[目的]为构建鼠伤寒沙门菌环化腺苷酸合成酶缺失株平衡致死系统,并对其生物学特性进行检测.[方法]以鼠伤寒沙门菌SL1344△cya株为亲本株,利用重组自杀性质粒(pRE△asd)介导的同源重组技术,经两步法缺失并筛选asd基因缺失株(SL1344△cya △asd).将含asd基因且无抗性的pYA3493质粒电转化至缺失株SL1344△cya△asd,构建重组菌株SL1344△cya△asd(pYA3493).[结果]试验结果表明,重组菌株SL1344△cya△asd(pYA3493)生化特性和生长速度与参考株SL1344相比差异较大,与亲本株SL1344△cya基本一致,SL1344△cya△asd(pYA3493)失去了利用麦芽糖、乳糖、山梨醇等碳源的能力,也不能分解H2S、半乳糖和鼠李糖,但仍保留了利用葡萄糖的能力.对1日龄雏鸡攻毒试验表明,SL1344△cya△asd(pYA3493)毒力较参考株SL1344降低了约104倍.免疫保护试验显示,1日龄雏鸡免疫SL1344△cya△asd(pYA3493)后第17天,利用鼠伤寒沙门菌参考株攻毒,保护率为62.5％.[结论]鼠伤寒沙门菌SL1344株环化腺苷酸合成酶缺失株平衡致死系统构建成功,且具有较好的免疫保护性,为深入研究以鼠伤寒沙门菌为载体的口服疫苗奠定基础.
作者：李静；陈松彪；余祖华；何雷；李小康；贾艳艳；郁川；张春杰；程相朝
来源：微生物学报 2015 年 55卷 7期
