目的:为构建减毒鼠伤寒沙门菌分泌性蛋白K1缺失株平衡致死系统,并将其开发为能够稳定携带外源基因的活疫苗载体.方法:利用重组自杀性质粒(pREΔasd)介导的等位基因交换技术,以减毒鼠伤寒沙门菌株SL1344ΔsseK1为亲本株,运用二步法筛选asd基因缺失株SL1344ΔsseK1Δasd.将携带有asd基因的无抗性pYA3493质粒电转至上述缺失菌株SL1344ΔsseK1Δasd,构建SL1344ΔsseK1Δasd(pYA3493)重组菌株.结果:PCR及测序结果表明SL1344ΔsseK1Δasd(pYA3493)构建成功.进一步研究表明重组菌株SL1344ΔsseK1Δasd(pYA3493)血清型和强毒株SL1344及亲本株SL1344ΔsseK1相同,且能稳定遗传缺失后的asd基因;其生化特性和生长速度与强毒株SL1344及亲本株SL1344ΔsseK1相比均无明显差异.小鼠毒力试验表明,SL1344ΔsseK1Δasd(pYA3493)口服感染6周龄BALB/c小鼠的LD50为5.24×108 CFU,毒力较强毒株SL1344约下降至0.048
作者：杨亚东；丁轲；张春杰；程相朝；贾艳艳；何雷
来源：中国免疫学杂志 2017 年 33卷 10期
