[目的]克隆温泉中嗜热嗜酸的脂环酸芽孢杆菌D-1 (Alicyclobacillus tengchongensis CGMCC1504)的内切葡聚糖酶基因gluE1,并对该酶进行序列分析和重组酶的酶学特性分析.[方法]通过全基因组测序获得gluE1全长,并对其氨基酸序列(GluE1)进行分析.将gluE1重组到载体pEASY-E2中并转化到大肠杆菌BL21(DE3)中异源表达,利用组氨酸标签纯化GluE1并进行酶学性质分析.[结果]gluE1与NCBI数据库中GH5的内切葡聚糖酶具有较高的相似性,全长1020 bp,GC含量50.5％,编码339个氨基酸(40.45 kDa).GluE1与数据库中序列的最高一致性为97％,与其余纤维素酶的一致性＜60％.GluE1可水解CMC-Na、可溶性淀粉和大麦β-葡聚糖,表观最适pH为6.5,pH 5.0-10.0稳定并维持60％以上的酶活性.GluE1的表观最适温度为55℃,在37℃下稳定.在55℃ pH 6.5条件下,GluE1对大麦β-葡聚糖的Km、Vmax和kcat分别为8.58 mg/mL、416.67 U/mg和280.90 s-1.GluE1受Ag+、Hg2+及SDS抑制,β-巯基乙醇、Pb2+、Mg2+、Ca2+和Na+对GluE1有微弱的促进作用,NaCl对GluE1的影响不大,加入30％的NaCl,仍有64％以上的酶活性;经30％的NaC1在37℃下处理60 min,仍能保持93％以上的活性.[结论]首次报道从Alicyclobacillus属的细菌中克隆得到内切葡聚糖酶基因并对其酶学性质进行研

作者：董明杰；杨云娟；唐湘华；李俊俊；黄遵锡

来源：微生物学报 2016 年 56卷 10期