[目的]阐明霍乱弧菌DsbA蛋白(VcDsbA)在生物被膜形成过程中的作用.[方法]采用Overlapping PCR的方法构建VcdsbA基因敲除质粒pMH524;采用同源重组和基因克隆的方法对霍乱弧菌dsbA(vc0034)基因进行敲除和回补;通过结晶紫染色实验,比较野生株(WT)、dsbA突变株(△dsbA)和回补菌株(C△dsbA)的生物被膜形成差异;用荧光素酶基因作为报告基因分析与生物被膜形成相关的甘露糖敏感血凝素纤毛合成蛋白(Mannose-sensitive hemagglutinin,pili biogenesis protein,MSHA)在霍乱弧菌WT、△dsbA和C△dsbA中表达水平的区别.[结果]成功构建霍乱弧菌dsbA基因缺失突变株和回补株;与WT相比,△dsbA生物被膜形成能力显著下降,且msh操纵子的表达水平显著降低.[结论]VcDsbA可能通过影响其它调控因子直接或间接增强霍乱弧菌MSHA的生物合成,从而促进霍乱弧菌生物被膜的形成.本文为进一步研究DsbA在霍乱弧菌生物被膜形成中的调控机制奠定了基础.
作者：薛媛媛；吴春琴；江秀军；甘超宁；宋厚辉；杨梦华
来源：微生物学报 2016 年 56卷 11期
