[目的]研究口蹄疫病毒(FMDV)结构蛋白VP0对Ⅰ型干扰素信号通路的影响.[方法]通过反转录PCR构建VP0真核表达载体,利用Western blotting验证VP0蛋白转染HEK-293T细胞后的表达情况;Real-time PCR检测VP0蛋白对FMDV在BHK细胞上复制的影响,检测VP0蛋白对SeV诱导的干扰素信号通路分子RIG-I、IRF3、IFN-β及下游刺激基因ISG15、ISG20表达的影响;双荧光素酶报告基因检测系统检测VP0蛋白对SeV诱导的IFN-β和NF-κB启动子激活以及对RIG-I样受体(RIG-I-like receptors,RLRs)信号通路分子激活IFN启动子的影响;免疫共沉淀检测VP0蛋白与RLRs信号通路中关键分子的相互作用.[结果]成功构建了pCAGGs-VP0真核表达载体,可以在HEK-293T细胞中表达;FMDV感染后的4-6h,VP0蛋白显著促进FMDV在BHK细胞上的复制(P＜0.01或P＜0.05);VP0蛋白明显抑制干扰素下游刺激基因的表达(P＜0.01或P＜0.05).在双荧光素酶报告基因检测实验中,VP0蛋白抑制SeV诱导IFN-p和NF-κB的活化具有剂量依赖性(P＜0.01),并对RIG-I、MDA5、VISA、TBK1和IRF3介导的IFN-β产生具有抑制作用,但是对IRF7没有明显的影响.免疫共沉淀显示VP0蛋白可与IRF3发生相互作用.[结论]证实VP0蛋白可以通过与IRF3相互作用来抑制Ⅰ型干扰素信号通路的激活.

作者：牟宏芳；马旭升；罗志宽；张坚；郑海学

来源：微生物学报 2017 年 57卷 7期