[目的]原核表达某些需辅因子的外源蛋白时往往酶活偏低, 为提高酶活和减少外加辅因子的成本, 我们尝试在大肠杆菌中表达外源过氧化氢-过氧化物酶的同时提高大肠杆菌中与该酶辅因子相关的合成代谢.[方法]本研究克隆了中度嗜盐菌Halomonas elongata DSM2581的过氧化氢-过氧化物酶CAT-POD (catalase-peroxidase) 编码基因kat G的ORF, 构建原核表达载体p ET28a-kat G, 实现了CAT-POD在大肠杆菌中的重组表达.由于CAT-POD活性依赖其活性中心血红素, 而血卟啉是血红素的骨架, 通过构建原核表达载体p UC19-tac-hem A, 将编码5-氨基乙酰丙酸合成酶的hem A基因在大肠杆菌中过量表达, 提高卟啉的含量, 从而提高重组蛋白CAT-POD的酶活.[结果]最终的CAT酶活达到了377 U/m L, 为对照组的7.5倍.[结论]本研究为工业生产高活性CAT-POD提供了有效的方案, 也为体外重组表达含辅因子的蛋白提供可借鉴的思路.
作者：黄莘；丁涛；黄非；白林含
来源：微生物学报 2018 年 58卷 9期
