[目的]漆酶可氧化各种底物,在多个工业领域有很好的潜在应用价值.Lac15是一种微生物漆酶,已表现出可观的应用潜能,可望通过蛋白质工程改造提升和拓展其应用.[方法]通过基于结构分析的半理性改造策略,选取推测与电子/质子转移或底物结合直接或间接相关的位点进行定点突变,并测定突变酶对各种底物的活性及酶学性质.[结果]部分突变体对某些底物的活性显著提升,其中D216N对ABTS的催化效率提高了1.0倍,R178V和K433T对多巴胺的催化效率分别增加了1.2和11.1倍.同时,这些突变体保留了野生型酶在应用中的优点如中性最适pH和盐促活等性质.[结论]利用基于结构的半理性改造方法,可改善漆酶Lac15对某些底物的活性.漆酶中的一个保守Asp,对应于Lac15中的D216,可作为提升以ABTS为底物或介体时漆酶活性的一个共同改造目标.
作者：谢雅楠；王瑞；李治；李杰；方泽民；房伟；张学成；肖亚中
来源：微生物学报 2022 年 62卷 4期
