[目的]乙酰乳酸合成酶(ALS)是异丁醇生物合成中的关键酶,实现ALS的高效表达对调控异丁醇代谢途径有重要意义.[方法]根据GenBank中ALS的基因序列(alsS)设计引物,以枯草芽孢杆菌168基因组DNA为模板通过PCR扩增技术得到目标酶基因,目的片段全长为1713 bp.将alsS连接到pET-30a(+)上,得到重组质粒pET-30a(+)-alsS,并在Escherichia coli BL21(DE3)中实现表达.[结果]对表达条件进行了优化,获得最佳表达条件为:诱导温度30℃,诱导起始菌体OD600为 0.6-0.8,诱导剂 IPTG 浓度为1 mmol/L,诱导时间为6h.表达的乙酰乳酸合成酶大部分以可溶性形式存在于菌体内,优化后酶活可达到24.4 U/mL,比优化前提高了7.13倍.经HisTrapTMFF亲和层析后获得电泳纯的ALS,比活为95.2 U/mg.[结论]ALS的有效表达为在大肠杆菌体内构建异丁醇代谢途径打下了基础.
作者：金美娟；吴坚平；徐刚；杨立荣
来源：微生物学通报 2012 年 39卷 11期
