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[目的]克隆锦鲤Hepcidin全长cDNA序列(k-hepc),并获得此基因在鱼体内的表达模式.[方法]利用RT-PCR和RACE PCR的方法,从锦鲤肝脏中克隆锦鲤Hepcidin的全长cDNA,进行序列测定和分析;锦鲤经肌肉注射维氏气单胞菌0、4、8、12、24和48 h后,分别取其肝、脾、肾、肠、脑、心、肌肉和鳃组织,采用实时荧光定量PCR的方法,以β-actin为内参基因,检测k-hepc基因的表达量.[结果]锦鲤抗菌肽(GenBank登录号KC795559)全长755 bp,编码序列276 bp,编码91个氨基酸,包括信号肽、原肽和成熟肽,成熟肽C端含有8个半胱氨酸,可形成4个分子内二硫键.与已报道的普通鲤鱼Hepcidin氨基酸序列的一致性为93%,与其他鱼类Hepcidin氨基酸序列的一致性为29%-93%.在本研究所检测的正常锦鲤的组织中,k-hepc均有表达,其中在肝组织中表达量最高,鳃组织中表达量最低.经维氏气单胞菌感染后,k-hepc在肝和心组织中的表达量明显增加,在其余组织中变化不显著.[结论]k-hepc编码的蛋白是Hepcidin冢族的成员之一.锦鲤Hepcidin的表达主要受内在调节因素影响.

作者:马志宏;姜娜;邢薇;李铁梁;袁丁;李文通;李炯棠;罗琳

来源:微生物学通报 2017 年 44卷 2期

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马志宏;姜娜;邢薇;李铁梁;袁丁;李文通;李炯棠;罗琳
来源:
微生物学通报 2017 年 44卷 2期
标签:
Hepcidin 锦鲤 克隆 序列分析 基因表达 Hepcidin Cyprinus carpio Cloning Sequencing Gene expression
[目的]克隆锦鲤Hepcidin全长cDNA序列(k-hepc),并获得此基因在鱼体内的表达模式.[方法]利用RT-PCR和RACE PCR的方法,从锦鲤肝脏中克隆锦鲤Hepcidin的全长cDNA,进行序列测定和分析;锦鲤经肌肉注射维氏气单胞菌0、4、8、12、24和48 h后,分别取其肝、脾、肾、肠、脑、心、肌肉和鳃组织,采用实时荧光定量PCR的方法,以β-actin为内参基因,检测k-hepc基因的表达量.[结果]锦鲤抗菌肽(GenBank登录号KC795559)全长755 bp,编码序列276 bp,编码91个氨基酸,包括信号肽、原肽和成熟肽,成熟肽C端含有8个半胱氨酸,可形成4个分子内二硫键.与已报道的普通鲤鱼Hepcidin氨基酸序列的一致性为93%,与其他鱼类Hepcidin氨基酸序列的一致性为29%-93%.在本研究所检测的正常锦鲤的组织中,k-hepc均有表达,其中在肝组织中表达量最高,鳃组织中表达量最低.经维氏气单胞菌感染后,k-hepc在肝和心组织中的表达量明显增加,在其余组织中变化不显著.[结论]k-hepc编码的蛋白是Hepcidin冢族的成员之一.锦鲤Hepcidin的表达主要受内在调节因素影响.