目的克隆人血小板生成素(hTPO)基因，并使其在原核细胞中获得表达。方法先从人胚胎肝脏中提取总RNA，进行RI-PCR获得编码氨基端195个氨基酸残基的hTPO195 cDNA。将该片段亚克隆至pGEM-T easy克隆质粒中，以双脱氧链末端终止法对克隆质粒直接测序。接着将cDNA插入到原核表达质粒pET28-a中，转化大肠杆菌BLR21(DE3)，进行诱导表达，以SDS-PAGE方法及免疫印迹法进行检测。结果得到的hTPO195cDNA与文献报道的序列完全一致。经诱导后hTPO基因在大肠杆菌中获得表达，目的蛋白占总菌体蛋白约10％，以免疫印迹法证实表达产物正确。结论得到cDNA，并在原核细胞中获得表达，得到截短形式的rhTPO195.
作者：王怀宇；刘陕西；Zheng Shu；郑树；陈念祖
来源：西安医科大学学报 2000 年 21卷 6期
