目的：从人肝癌组织中克隆人的Cyclin D1基因，并原核表达Cyclin D1蛋白。方法从人肝癌组织中提取RNA，逆转录PCR扩增Cyclin D1 cDNA，PCR产物进行TA克隆和DNA序列分析；阳性TA克隆Cyclin D1片段亚克隆入大肠杆菌BL21的表达载体PET32a＋，异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷（Isopropylβ-D-1-thiogalactopyranoside，IPTG）诱导表达人Cyc-lin D1。结果逆转录PCR扩增出约483 bp的DNA片段，TA克隆和DNA序列分析显示重组片段是人Cyclin D1基因序列， Cyclin D1 cDNA亚克隆入大肠杆菌中BL21载体NotI和EcoRI位点之间；异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷（ Isopropyl β-D-1-thio-galactopyranoside ，IPTG）诱导出约36 KD的蛋白。结论从人肝癌组织中成功地扩增出人Cyclin D1基因，并且在大肠杆菌中BL21得到表达。
作者：谭艳；韩晓芳；贾海琴；白瑞霞
来源：中国医师杂志 2014 年 2期
