[背景]猪流行性腹泻、猪轮状病毒病与猪伪狂犬病是严重危害全球养猪业的 3种重要传染病,混合感染往往导致猪场史严重的损失.[目的]利用同源重组技术构建共表达猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)S蛋白和猪轮状病毒(Rotavirus,PoRV)VP7蛋白的猪伪狂犬三联基因工程疫苗株,并研究其部分生物学特性.[方法]通过序列比对、蛋白结构分析筛选 s基因的 475-804 aa和 vp7基因的 17-339 aa作为毒株构建的目的片段,依次构建了 pMD-S 、pMD-VP7 、pMD-VP7.S克隆载体和 pEGFP-VP7.S转移载体.将质粒 pEGFP-VP7.S和 PRV XJ亲本株同源重组,空斑纯化得到重组毒株PRV(CM),对其稳定性和增殖特性进行研究.[结果]构建了共表达 S蛋白和 VP7蛋白的伪狂犬基因工程病毒,连续传代 20次,均能检测到vp7和 s基因,而 gE基因阴性;Westem blotting证实 2种外源基因在重组病毒中均能实现良好的表达;测定亲本毒林和重组毒株的TCID50分别是 10-7.59/0.1 mL和 10-7.25/0.1 mL.[结论]获得了伪狂犬基因工程重组弱毒株 PRV(CM),外源基因稳定存在,毒力基因稳定缺失,增殖特性差异不大,为 PRV 、PEDV和 PoRV基因工程三联苗研究奠定了基础.
作者：毛汐语；周雪珂；殷鑫欢；邓益超；龚双燕；李小璟；李幽幽；徐志文；朱玲
来源：微生物学通报 2019 年 46卷 12期
