目的:明确Sirt6对软骨细胞衰老的影响,探讨自噬在Sirt6抑制软骨细胞衰老中的作用.方法:体外培养SD大鼠膝关节软骨细胞,通过连续传代致软骨细胞衰老,β-半乳糖苷酶(β-gal)染色检测细胞衰老, Western blot检测Sirt6的蛋白表达变化.原代软骨细胞中借助慢病毒敲低Sirt6或过表达Sirt6,比较各组的最大传代次数及细胞衰老情况,通过qPCR比较二型胶原(Collagen-Ⅱ)、蛋白聚糖(Aggrecan)、基质金属蛋白酶-13(MMP-13)及ADAMT-5的mRNA表达来探讨Sirt6对软骨细胞功能的影响.在软骨细胞中过表达Sirt6后通过免疫荧光染色观察细胞中自噬泡的变化,Western blot检测LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ的比例来探讨Sirt6对软骨细胞自噬的影响.在过表达Sirt6的同时通过使用自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)来验证细胞自噬在Sirt6抑制软骨细胞衰老和功能退变中的作用.结果:连续体外培养软骨细胞,随着细胞传代次数的增加, Sirt6基因的表达量逐渐降低,原代软骨细胞中敲低Sirt6后,软骨细胞提前衰老,P16蛋白的表达量明显升高;软骨细胞中过表达Sirt6可以明显延缓细胞衰老;Sirt6可以促进软骨细胞自噬的发生;使用自噬抑制剂后可以明显抑制Sirt6对软骨细胞的保护作用.结论:提高Sirt6的表达水平可以延缓软骨细胞衰老及退变,且这种作用与Sirt6促进软骨细胞自噬
作者：张辉；孙嘉利；陈泽新；武垚森；林焱
来源：温州医科大学学报 2018 年 48卷 5期
