目的:采用葡聚糖硫酸钠(DSS)构建实验性结肠炎小鼠模型,探讨肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)的受体基因敲除(TRAIL-R-/-)对结肠炎症及Th17细胞凋亡的影响.方法:将C57BL/6品系小鼠分为4组:TRAIL-R-/-结肠炎组、TRAIL-R-/-对照组、野生型(WT)结肠炎组、WT对照组,每组各9只.结肠炎组饮用3.5%的DSS,对照组饮用清水.7 d后,从临床表现和组织病理学上评估小鼠结肠炎的严重程度.取外周血单个核细胞(PBMCs)和结肠黏膜固有层单个核细胞(LPMCs),采用流式细胞术检测Th17细胞占CD4+T细胞的比例,采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)、Western blot和酶联免疫吸附测定(ELISA)检测视黄酸相关孤儿受体(ROR-γt)和IL-17A的mRNA和蛋白表达水平.采用TUNEL荧光染色技术及激光共聚焦显微镜观察结肠组织中Th17细胞的凋亡率.通过比色法检测结肠组织中凋亡蛋白酶Caspase 3、Caspase 8和Caspase 9的活性.结果:DSS诱导后,TRAIL-R-/-小鼠较WT小鼠发生了更为严重的结肠炎.TRAIL-R-/-结肠炎小鼠PBMCs中Th17细胞的比例(P<0.01),以及ROR-γt和IL-17A的mRNA和蛋白表达水平均显著高于WT结肠炎小鼠(均P<0.05).TRAIL-R-/-结肠炎小鼠LPMCs中Th17细胞的比例(P<0.01),以及ROR-γt和IL-17A的mRNA和蛋白表达水平均显著高于WT结肠炎小鼠(均
作者:金颖莉;夏宣平;曹曙光;林道泼;胡定元;夏盛隆;蒋益
来源:温州医科大学学报 2020 年 50卷 12期