目的 构建含人谷胱苷肽过氧化物酶(GSH-Px)基因的重组腺病毒载体,为基因治疗提供一种新的方法.方法 从人血中分离出白细胞,提取总RNA,采用RT-PCR法获得人GPx-1和人GPx-2的全长cDNA,克隆到pcDNA3.1+中,构建pcDNA3.1+GPx-1和pcDNA3.1+GPx-2载体,酶切和基因测序鉴定阳性克隆；采用酶切法把GPx-1和GPx-2基因克隆至入门载体pENTR1A中,构建pENTR1A-GPx-1和pENTR1A-GPx-2载体.采用LR反应,体外重组pENTR1A-GPx-1或pENTR1A-GPx-2和pAd/CMV/V5-DEST,得重组腺病毒表达载体pAd/CMV/V5-DEST-GPx-1和pAd/CMV/V5-DEST-GPx-2.PCR和序列测定鉴定重组腺病毒载体.293A细胞中包装和扩增GSH-Px-1和GSH-Px-2的重组腺病毒.结果 获得GSH-Px-1和GSH-Px-2的重组腺病毒载体和重组腺病毒.结论 成功构建了pAd/CMV/V5-DEST GPx-1和pAd/CMV/V5 DEST-GPx-2重组腺病毒载体,并在293A中获得该重组腺病毒,为进一步研究人GSH-Px基因在基因治疗中的作用奠定了基础.
作者：宁启兰；许楠；王慧莲
来源：西安交通大学学报（医学版） 2013 年 34卷 1期
