目的 构建含有人肠三叶因子基因cDNA的腺病毒载体,并观察其对肠上皮细胞的感染能力.方法 利用PCR技术扩增hITF基因cDNA全长序列,测序后亚克隆至腺病毒穿梭质粒,转化至含腺病毒骨架质粒pAdEasy-1大肠杆菌株BJ5183感受态细胞中进行同源重组,内切酶PmeⅠ线性化后转染HEK293细胞进行病毒包装及扩增,并进行滴度测定.将重组腺病毒感染肠上皮细胞(HT-29),荧光显微镜观察感染效果.结果 成功构建出重组穿梭质粒pAdTrack-CMV-hITF,Pme Ⅰ线性化后与骨架质粒pAdEasy-1同源重组,Pac Ⅰ酶切鉴定后命名为Ad-hITF;重组腺病毒载体在HEK293细胞中包装,获得重组腺病毒颗粒;根据Karbers公式计算病毒颗粒滴度为2×109 pfu/mL;重组腺病毒可以感染肠上皮细胞(HT-29),感染效率较高.结论 成功构建含hITF基因cDNA的重组腺病毒载体并获得大量子代重组腺病毒,为腺病毒介导hITF基因治疗的应用打下基础.
作者：勒娟；孙勇；陈宝君；潘晓峰；张方
来源：西安交通大学学报（医学版） 2014 年 35卷 6期
