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CD147可以促进基质金属蛋白酶(MMPs)的表达,与肿瘤的生长和浸润有关.为了研究CD147在大肠癌中的作用,利用RT-PCR从一健康人克隆了cd147基因,测序发现该基因存在两个碱基突变,其中C634T造成了CD147跨膜区212位氨基酸由L突变为F.分别构建CD147的原核(pGEX-5x-147)和真核(pEGFP-147)表达系统,在宿主菌BL21和CCL229细胞中均获得了稳定表达.Western印迹显示原核表达产物比真核CD147分子量小,说明原核CD147缺乏糖基化.荧光显微镜显示真核CD147表达定位于CCL229细胞膜,表明突变L212F不影响CD147的膜定位.用明胶电泳检测表达的CD147对MMPs表达的影响,结果显示原核产物不能诱导MMPs表达上调,而真核产物能够明显诱导MMPs表达上调,说明糖基化对于CD147活性是必需的,真核系统能够表达具有生物功能的CD147,并且突变L212F不会影响蛋白质的活性.

作者:封青川;陈思娇;宋今丹

来源:细胞生物学杂志 2006 年 28卷 6期

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作者:
封青川;陈思娇;宋今丹
来源:
细胞生物学杂志 2006 年 28卷 6期
标签:
CD147 基质金属蛋白酶 基因克隆 基因表达
CD147可以促进基质金属蛋白酶(MMPs)的表达,与肿瘤的生长和浸润有关.为了研究CD147在大肠癌中的作用,利用RT-PCR从一健康人克隆了cd147基因,测序发现该基因存在两个碱基突变,其中C634T造成了CD147跨膜区212位氨基酸由L突变为F.分别构建CD147的原核(pGEX-5x-147)和真核(pEGFP-147)表达系统,在宿主菌BL21和CCL229细胞中均获得了稳定表达.Western印迹显示原核表达产物比真核CD147分子量小,说明原核CD147缺乏糖基化.荧光显微镜显示真核CD147表达定位于CCL229细胞膜,表明突变L212F不影响CD147的膜定位.用明胶电泳检测表达的CD147对MMPs表达的影响,结果显示原核产物不能诱导MMPs表达上调,而真核产物能够明显诱导MMPs表达上调,说明糖基化对于CD147活性是必需的,真核系统能够表达具有生物功能的CD147,并且突变L212F不会影响蛋白质的活性.