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目的:探讨重组腺病毒介导的小RNA干扰(small interfering RNA,siRNA)沉默CD147基因表达对人膀胱癌T-24细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响.方法:构建针对CD147基因的siRNA重组腺病毒表达载体Ad-CD147 siRNA,感染人膀胱癌T-24细胞.实验设空白对照组(Mock)、阴性对照组(Ad-siControl)和干扰组(Ad-CD147 siRNA).采用RT-PCR检测CD147和血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF) mRNA的表达水平;蛋白质印迹法检测CD147蛋白的表达水平;MTT法检测细胞增殖的情况,Transwell小室法和划痕实验检测对细胞侵袭和迁移能力的影响;明胶酶谱实验检测基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)和MMP-9的分泌情况;ELISA法检测VEGF蛋白分泌水平.结果:成功构建了Ad-CD147 siRNA腺病毒表达载体,Ad-CD147 siRNA可使T-24细胞CD147 mRNA和蛋白表达量下调>90%(P<0.01),细胞增殖速率下降>40%(P<0.01),细胞侵袭力和迁移力明显下降(P<0.01),MMP-2和MMP-9的分泌量分别下降了68.5%和37.1%(P< 0.01),VEGF mRNA和蛋白表达水平分别下降了57.2%(P< 0.01)和56.5%(P<0.01).结论:Ad-CD147 siRNA能有效抑制T-24细胞中CD147基因的表达,继而降低细胞增殖、迁移及侵袭能力.因此,CD147有可能成为膀胱癌

作者:薛义军;孙志熙;邹晓峰;肖日海;张国玺;袁源湖;龙大治;吴玉婷;徐刚

来源:肿瘤 2012 年 32卷 5期

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薛义军;孙志熙;邹晓峰;肖日海;张国玺;袁源湖;龙大治;吴玉婷;徐刚
来源:
肿瘤 2012 年 32卷 5期
标签:
膀胱肿瘤 基质金属蛋白酶类 RNA,小分子干扰 腺病毒感染 基因,CD147
目的:探讨重组腺病毒介导的小RNA干扰(small interfering RNA,siRNA)沉默CD147基因表达对人膀胱癌T-24细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响.方法:构建针对CD147基因的siRNA重组腺病毒表达载体Ad-CD147 siRNA,感染人膀胱癌T-24细胞.实验设空白对照组(Mock)、阴性对照组(Ad-siControl)和干扰组(Ad-CD147 siRNA).采用RT-PCR检测CD147和血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF) mRNA的表达水平;蛋白质印迹法检测CD147蛋白的表达水平;MTT法检测细胞增殖的情况,Transwell小室法和划痕实验检测对细胞侵袭和迁移能力的影响;明胶酶谱实验检测基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)和MMP-9的分泌情况;ELISA法检测VEGF蛋白分泌水平.结果:成功构建了Ad-CD147 siRNA腺病毒表达载体,Ad-CD147 siRNA可使T-24细胞CD147 mRNA和蛋白表达量下调>90%(P<0.01),细胞增殖速率下降>40%(P<0.01),细胞侵袭力和迁移力明显下降(P<0.01),MMP-2和MMP-9的分泌量分别下降了68.5%和37.1%(P< 0.01),VEGF mRNA和蛋白表达水平分别下降了57.2%(P< 0.01)和56.5%(P<0.01).结论:Ad-CD147 siRNA能有效抑制T-24细胞中CD147基因的表达,继而降低细胞增殖、迁移及侵袭能力.因此,CD147有可能成为膀胱癌