目的:构建抗膀胱癌重组免疫毒素BDI-1-PE38/KDEL的可溶性表达载体,并表达、纯化具有抗肿瘤活性的可溶性蛋白.方法:将抗膀胱癌重组免疫毒素BDI-1-PE38/KDEL的基因片段,插入含有大肠杆菌脯氨酰顺反异构酶FkpA基因的共表达载体pTMFK中,构建重组共表达载体pTMFK-IT.以重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)-Star,共表达目的蛋白与Fk-pA.表达产物以镍离子金属螯合层析柱及抗PE抗体亲和柱层析进行纯化.用ELISA检测免疫毒素的抗原结合活性,用噻唑蓝(MTT)法进行体外细胞杀伤实验.结果:成功地构建了抗膀胱癌免疫毒素基因与FkpA基因的共表达载体,并获得纯度较高的目的表达产物.纯化后的表达产物与BIU-87膀胱癌细胞膜抗原具有良好的特异性结合活性,对BIU-87膀胱癌细胞有明显的体外特异性杀伤作用.结论:获得了对膀胱癌细胞具有显著特异性杀伤活性的免疫毒素,为将其进一步应用于膀胱癌的靶向治疗研究奠定了基础.
作者：晁开；何丹；杨慧；张众；林晴；郭蔼光；黄华樑
来源：细胞与分子免疫学杂志 2004 年 20卷 5期
