目的:通过基因过表达和RNA干扰(RNAi)技术改变PTEN基因的表达并观察其对人支气管平滑肌细胞(BSMC)增殖和相关信号通路的影响.方法:利用携带野生型PTEN基因的重组腺病毒(Ad-GFP-PTEN)和针对PTEN基因的腺病毒短发夹状RNA(shRNA)载体(Ad-GFP-shRNA-PTEN),转染BSMC细胞,建立PTEN基因过表达细胞模型Ad-GFP-PTEN-BSMC和PTEN基因沉默细胞模型Ad-GFP-shPTEN-BSMC,并以感染Ad-GFP和空白组作为对照.通过荧光倒置显微镜检测转染效率;Western blot法检测PTEN蛋白的表达和AKT、ERK1/2通路的活化情况;MTS/PMS法检测细胞生长的变化;PI单染流式细胞术检测细胞周期的变化.结果:腺病毒介导的过表达载体和shRNA载体都能有效改变PTEN基因的表达.PTEN基因表达上调后,BSMC细胞生长受到抑制,G_0-G_1期细胞增多,S期细胞和G_2/M期细胞减少,PI3K/AKT通路受到抑制,而MAPK/ERK通路未见变化;PTEN基因表达下调后,BSMC细胞生长受到促进,S期细胞增多,G_0-G_1期细胞和G_2/M期细胞减少,PI3K/AKT通路激活,但MAPK/ERK通路却受到抑制.结论:PTEN基因可能主要通过调节PBK/AKT通路影响人支气管平滑肌细胞的生长.
作者：张达成；罗雅玲；赖文岩；钟浩海；陈丽丽
来源：细胞与分子免疫学杂志 2010 年 26卷 1期
