目的 SET基因表达产物是SET/TAF-1β蛋白,功能涉及基因表达调控、染色质修饰、翻译后修饰等生物过程,多水平、多通路地调节靶因子,其表达异常与多种疾病相关.为研究SET基因与临床多种疾病发生发展的关系,文中构建表达人SET基因的小分子干扰RNA (siRNA)重组腺病毒载体. 方法 根据siRNA靶序列设计并合成2条互补的64 bp寡核苷酸.pShuttle-H1穿梭质粒经BglⅡ、HindⅢ双酶切后,与退火的寡核苷酸连接,构建穿梭质粒pShuttle-H1-siRNA. 该穿梭质粒经NotⅠ和HindⅢ双酶切后与 pAdTrack-CMV 连接,构建含有绿色荧光蛋白(green fluorescense protein,GFP)报告基因的穿梭质粒PATC-H1-siRNA.分别将腺病毒骨架质粒pAdEasy-1和穿梭质粒PATC-H1-siRNA 转化至BJ-5183感受态细菌中进行同源重组.PacⅠ酶切线性化重组质粒pAd-H1-siRNA后,转染AD293细胞进行病毒包装和扩增.根据GFP报告基因的表达观察重组病毒的产生和感染效率,用Western blot检测人SET蛋白的表达水平.　结果 穿梭质粒pShuttle-H1-siRNA经双酶切和测序证实构建成功;重组腺病毒载体经AD293细胞包装后可观察到GFP表达;获得的重组腺病毒载体感染AD293细胞.经Western blot检测,SET基因腺病毒载体(AdH1-SiRNA/SET)感染组与未感染腺病毒载体组(空白对照)和感染对照腺病

作者：许波群；李瑛；薛凯；李梅；马翔；刁飞扬；崔毓桂；刘嘉茵

来源：医学研究生学报 2010 年 23卷 2期