目的:构建以寡聚精氨酸(R9)为蛋白质转导结构域的嵌合抗体/caspase-3的真核表达载体,并检测瞬时转染该载体对HER2阳性SGC-7901肿瘤细胞及HER2阴性HeLa肿瘤细胞生长的影响.方法:用PCR法获得融合了R9的活性caspase-3基因片段,并将其克隆人含有HER2单链抗体e23sFv基因的真核表达载体,以脂质体法转染SGC-7901细胞及HeLa细胞.用间接免疫荧光、细胞计数等方法,检测其在两种细胞中的表达及其对两种细胞生长的影响.结果:成功构建了以R9为蛋白质转导结构域的嵌合抗体/caspase-3基因真核表达载体pCMV-e23sFv-R9-casp3,瞬时转染该质粒发现SGC-7901细胞和HeLa细胞均以分泌形式表达e23sFv-R9-casp3蛋白,但SGC-7901细胞生长受到明显抑制,细胞形态发生改变,出现核浓缩等凋亡特征;而HeLa细胞生长未受抑制,细胞形态无明显变化.结论:以分泌形式表达的嵌合蛋白,其HER2抗体部分能够介导靶向识别,R9可以辅助效应分子活化、转位至细胞液,活性easpase-3能高效杀伤细胞.
作者：赵智凝；王涛；任君琳；张瑞；赵晶；温伟红；贾林涛；杨安钢
来源：细胞与分子免疫学杂志 2010 年 26卷 8期
