目的 制备抗乙型肝炎病毒(HBV)表面抗原(HBsAg)表位单克隆抗体(mAb),建立HBV血清型夹心ELISA检测方法.方法 将HBsAg亚型蛋白分别免疫小鼠,通过细胞融合、高通量筛选ELISA (HTS-ELISA)筛选后得到杂交瘤细胞株并在无血清培养基中扩大培养.采用蛋白A对抗体进行纯化并测定抗体亲和力、亚型、特异性,最后建立双抗体夹心ELISA.结果 HBsAg的亚型蛋白ad、adr及ayw分别免疫小鼠后,其血清效价达到1∶105.细胞融合及HTS-ELISA筛选后获得4株杂交瘤细胞株.经过纯化后得到的mAb分别命名为#2-4,#18-3,#7-7,#56-5,亲和力都在1×109 L/mol以上.间接ELISA结果显示,#2-4,#18-3,#7-7,#56-5分别特异性地与HBsAg的“d,y,r,w”表位结合.用抗HBsAg“a”表位的mAb#3-11分别与这4株抗体组合,进行夹心ELISA检测.结果显示,不同的ELISA组合能特异性地检测HBsAg的“d,y,r,w”表位.结论 成功制备了亲和力高、特异性好的抗HBsAg 4个表位的mAb,建立了检测HBV血清型的双抗体夹心ELISA.
作者：张晓磊；聂玉哲；蓝兴国；李玉花
来源：细胞与分子免疫学杂志 2014 年 30卷 2期
