目的 构建胰岛素样生长因子2 mRNA结合蛋白3(IGF2 BP3)的原核表达载体,在大肠杆菌中表达并纯化IGF2BP3-His融合蛋白,制备和鉴定小鼠抗人IGF2BP3多克隆抗体.方法 用PCR方法扩增IGF2BP3基因,构建到pET-28a原核表达载体中,转化大肠杆菌BL21(DE3),诱导IGF2BP3蛋白的表达.所获得的蛋白经镍柱亲和层析纯化,并用透析方法脱去尿素使蛋白复性,获得IGF2BP3原核表达蛋白.将制备的原核表达蛋白免疫BALB/c小鼠,制备多克隆抗体,再用ELISA、Western blot法、免疫组织化学法对抗体的反应性及特异性进行鉴定.结果 成功克隆出IGF2BP3基因,经测序与GenBank公布的序列一致;PCR酶切鉴定证实成功构建了pET-28a-IGF2 BP3原核表达载体;质粒在BL21(DE3)中成功表达出相对分子质量(Mr)为70 000左右的融合蛋白,纯化后经SDS-PAGE分析纯度在90％以上.ELISA确定抗体效价在1∶50 000以上,且Western blot法和免疫组织化学技术均证实多克隆抗体能特异性识别目的蛋白.结论 成功制备了特异性的小鼠抗人IGF2BP3的多克隆抗体.
作者：赵伟；徐清问；杨颖；童晶晶；张君；李燕；邵壮；李鲁
来源：细胞与分子免疫学杂志 2015 年 31卷 4期
