背景:人胰岛素样生长因子1基因对脂肪源性干细胞的增殖和分化也可能会产生有效作用.目的:验证人胰岛素样生长因子1基因转染对体外培养的脂肪源性干细胞的效应.方法:构建含人胰岛素样生长因子1基因的双顺反子真核表达载体 pIRES2-EGFP-hIGF-1,利用阳离子脂质体 Lipofectamine 2000介导转染体外培养的人脂肪源性干细胞.观察基因转染后细胞增殖及形态的变化,倒置荧光显微镜观测标记基因增强绿色荧光蛋白的表达并计算转染效率,酶联免疫吸附试验检测培养上清中人胰岛素样生长因子1的浓度,免疫组织化学染色及 RT-PCR 检测人胰岛素样生长因子1的表达,流式细胞仪检测转染前后细胞周期的变化.结果与结论:测序及酶切证实真核表达载体 pIRES2-EGFP-hIGF-1构建正确.体外培养的脂肪源性干细胞为多种形态并存,转染后6 h 检测到有 EGFP 的表达,至60 h 达到高峰,转染效率为(16±3)
作者：张海宁；丁昌荣；吕成昱；王英振；周峰；续宗耀
来源：中国组织工程研究 2013 年 6期
