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目的 研究miR-155在调控巨噬细胞炎症反应及脂质摄取中的作用及机制.方法 使用(0、25、50、100) μg/mL氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)刺激RAW264.7细胞24h和50 μg/mL ox-LDL分别处理RAW264.7细胞0、6、12、24h后,应用实时定量PCR检测细胞miR-155的水平;将细胞分为对照组、ox-LDL处理组、ox-LDL/阴性对照组、ox-LDL/miR-155拮抗物组、ox-LDL/shRNA阴性对照组、ox-LDL/过氧化物酶体增殖物激活受体γ-短发夹RNA (PPARγ-shRNA)组.上述细胞样本用油红O染色观察细胞内脂滴沉积、Filipin染色检测细胞ox-LDL摄取情况,胆固醇检测试剂盒检测细胞总胆固醇(TC)和游离胆固醇(FC)含量,实时定量PCR分别检测肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)、IL-6的mRNA水平;按实验目的,分别观察miR-155拮抗物(对照组、ox-LDL处理组、ox-LDL/阴性对照组、ox-LDL/miR-155拮抗物组)、miR-155模拟物(阴性对照组、miR-155模拟物组)、shRNA干涉PPARγ(对照组、ox-LDL处理组、ox-LDL/shRNA阴性对照组、ox-LDL/PPARγ-shRNA组)对RAW264.7细胞中ox-LDL刺激的作用机制,Western blot法检测磷酸化的信号转导子和转录激活子3(p-STAT3)、PPARγ、CD36和核因子κBp65(NF-κBp65)的蛋白水平.结果 随着ox-LDL剂量和处理时间的增加,miR-155

作者:张晓亮;叶金善;梁星;杨丽霞

来源:细胞与分子免疫学杂志 2017 年 33卷 8期

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作者:
张晓亮;叶金善;梁星;杨丽霞
来源:
细胞与分子免疫学杂志 2017 年 33卷 8期
标签:
miR-155 氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL) 巨噬细胞 炎症 miR-155 ox-LDL macrophages inflammation
目的 研究miR-155在调控巨噬细胞炎症反应及脂质摄取中的作用及机制.方法 使用(0、25、50、100) μg/mL氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)刺激RAW264.7细胞24h和50 μg/mL ox-LDL分别处理RAW264.7细胞0、6、12、24h后,应用实时定量PCR检测细胞miR-155的水平;将细胞分为对照组、ox-LDL处理组、ox-LDL/阴性对照组、ox-LDL/miR-155拮抗物组、ox-LDL/shRNA阴性对照组、ox-LDL/过氧化物酶体增殖物激活受体γ-短发夹RNA (PPARγ-shRNA)组.上述细胞样本用油红O染色观察细胞内脂滴沉积、Filipin染色检测细胞ox-LDL摄取情况,胆固醇检测试剂盒检测细胞总胆固醇(TC)和游离胆固醇(FC)含量,实时定量PCR分别检测肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)、IL-6的mRNA水平;按实验目的,分别观察miR-155拮抗物(对照组、ox-LDL处理组、ox-LDL/阴性对照组、ox-LDL/miR-155拮抗物组)、miR-155模拟物(阴性对照组、miR-155模拟物组)、shRNA干涉PPARγ(对照组、ox-LDL处理组、ox-LDL/shRNA阴性对照组、ox-LDL/PPARγ-shRNA组)对RAW264.7细胞中ox-LDL刺激的作用机制,Western blot法检测磷酸化的信号转导子和转录激活子3(p-STAT3)、PPARγ、CD36和核因子κBp65(NF-κBp65)的蛋白水平.结果 随着ox-LDL剂量和处理时间的增加,miR-155