目的 探讨Rho激酶抑制剂Y-27632预处理对H9c2心肌细胞缺氧/复氧(H/R)损伤的保护作用及其机制.方法 将培养的心肌细胞分成正常组、H/R组、Y-27632组和Y-27632联合3-MA组(Y-27632/3-MA组).正常组在950mL/L空气、50 mL/L CO2 37℃培养箱中孵育6h;H/R组先用940 mL/L N2、10 mL/L O2、50 mL/L CO2的混合气培养3h,再转入950 mL/L空气、50 mL/L CO2培养箱孵育3 h;Y-27632组先给予10 μnol/L Rho激酶抑制剂Y-27632孵育1h,之后行H/R处理.Y-27632/3-MA组先给予10 μmol/LY-27632和5 mmol/L自噬抑制剂3-MA孵育1h,再H/R处理.采用CCK-8比色法测定各组细胞的存活率;试剂盒测定乳酸脱氢酶(LDH)活性;流式细胞术检测心肌细胞凋亡率;Western blot法检测磷酸化肌球蛋白轻链(p-MLC)及自噬基因beclin 1蛋白水平.结果 Y-27632预处理明显改善H/R介导的H9c2心肌细胞存活率,降低LDH活性,减少细胞凋亡,降低p-MLC蛋白水平,增加beclin 1蛋白表达;而Y-27632/3-MA组抵消了Y-27632对H9c2细胞的抗凋亡作用,并增高p-MLC和降低beclin 1蛋白表达.结论 Y-27632预处理通过抑制Rho激酶诱导自噬的发生减轻心肌细胞H/R损伤.
作者：于影；闵凤；叶红伟；方婷婷；贾贤杰；周成超
来源：细胞与分子免疫学杂志 2017 年 33卷 11期
