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目的:探讨吗啡预处理( morphine preconditioning, MPC)对 H9c2心肌细胞缺氧/复氧( hypoxia reoxygenation, H/R)时microRNA( miRNA)表达的影响,为明确其机制提供参考。方法培养H9 c2心肌细胞,随机分为3组( n=4):①正常对照组(CON):H9c2心肌细胞置于DMEM/F12细胞培养液常规培养;②缺氧/复氧组( H/R):对心肌细胞行缺氧5 h/复氧1 h处理;③吗啡预处理组( MPC+H/R):在H/R前,应用1μmol·L-1吗啡预处理10 min。处理结束后,采用CCK-8法检测细胞增殖、化学比色法检测细胞培养液中乳酸脱氢酶( LDH)活性、Annexin-V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡、Western blot法检测细胞内Fas蛋白表达、荧光定量RT-PCR法检测细胞 miRNA 表达水平。结果与 CON 组比,H/R组细胞活力降低,LDH活性升高,细胞凋亡率增加, Fas蛋白水平升高(P<0.01);MPC可明显提高细胞活力,降低LDH活性,抑制细胞凋亡,降低Fas蛋白水平( P<0.01)。qRT-PCR结果显示,与 CON 组相比,H/R 组 miR-133a-5p、miR-133b-5p、miR-664-1-5p、miR-6216和 let-7e-5p表达明显下调,而MPC能明显地抑制H/R对这些miRNA表达的下调作用(P<0.01)。结论吗啡预处理减轻H9c2心肌细胞缺氧/复氧损伤可能与调控 miR-133a-5p、miR-133b-5p、miR-664-1-5p、miR-6216和let7e-5p等mi

作者:韩正怡;何淑芳;程洁;许士进;杨婉;张野

来源:中国药理学通报 2015 年 11期

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作者:
韩正怡;何淑芳;程洁;许士进;杨婉;张野
来源:
中国药理学通报 2015 年 11期
标签:
吗啡预处理 H9c2心肌细胞 缺氧/复氧 凋亡 Fas 微小RNA morphine preconditioning H9 c2 myocar-dial cells hypoxia-reoxygenation apoptosis Fas mi-croRNAs
目的:探讨吗啡预处理( morphine preconditioning, MPC)对 H9c2心肌细胞缺氧/复氧( hypoxia reoxygenation, H/R)时microRNA( miRNA)表达的影响,为明确其机制提供参考。方法培养H9 c2心肌细胞,随机分为3组( n=4):①正常对照组(CON):H9c2心肌细胞置于DMEM/F12细胞培养液常规培养;②缺氧/复氧组( H/R):对心肌细胞行缺氧5 h/复氧1 h处理;③吗啡预处理组( MPC+H/R):在H/R前,应用1μmol·L-1吗啡预处理10 min。处理结束后,采用CCK-8法检测细胞增殖、化学比色法检测细胞培养液中乳酸脱氢酶( LDH)活性、Annexin-V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡、Western blot法检测细胞内Fas蛋白表达、荧光定量RT-PCR法检测细胞 miRNA 表达水平。结果与 CON 组比,H/R组细胞活力降低,LDH活性升高,细胞凋亡率增加, Fas蛋白水平升高(P<0.01);MPC可明显提高细胞活力,降低LDH活性,抑制细胞凋亡,降低Fas蛋白水平( P<0.01)。qRT-PCR结果显示,与 CON 组相比,H/R 组 miR-133a-5p、miR-133b-5p、miR-664-1-5p、miR-6216和 let-7e-5p表达明显下调,而MPC能明显地抑制H/R对这些miRNA表达的下调作用(P<0.01)。结论吗啡预处理减轻H9c2心肌细胞缺氧/复氧损伤可能与调控 miR-133a-5p、miR-133b-5p、miR-664-1-5p、miR-6216和let7e-5p等mi