目的:观察人骨髓间充质干细胞体外培养定向分化为肝细胞样细胞的过程及其特征.方法:实验于2003-12/2004-05在中山大学附属第二医院林百欣医学研究中心实验室完成.人骨髓取自髂后上嵴骨髓穿刺的健康供者,来源于中山大学附属第二医院儿科患儿健康家属.全骨髓贴壁筛选法分离出骨髓间充质干细胞,体外扩增后以流式细胞仪鉴定其表面标志.取扩增5代的骨髓间充质干细胞,分为2组,分化组于加入20 μg/L肝细胞生长因子和10 μg/L成纤维细胞生长因子4的opti-MEMI低血清培养基中诱导分化,空白对照组则不加任何细胞因子.2周后,行细胞形态学观察,并检测成热肝细胞的糖原合成和尿素分泌功能(免疫细胞化学法检测甲胎蛋白、白蛋白及细胞角蛋白18,19表达,反转录-聚合酶链式反应检测甲胎蛋白、白蛋白基因mRNA转录水平,高碘酸-Schiff染色检测糖原及紫外分光光度法测定尿素氮合量).结果:①流式细胞仪显示第5代骨髓间充质干细胞高表达表面抗原白细胞分化抗原29,不表达白细胞分化抗原34,11b.②分化组骨髓间充质干细胞至第14天,部分细胞分化为多角形的肝细胞样细胞.③免疫细胞化学法检测到细胞特异性表达甲胎蛋白、白蛋白及细胞角蛋白18,19,反转录-聚合酶链式反应显示有甲胎蛋白和白蛋白mRNA转录.④高碘酸-Schiff糖原染色可见胞浆
作者：汤志华；闵军；陈积圣；霍景山；胡孝渠；殷香保；陈波
来源：中国临床康复 2005 年 9卷 19期
