目的:构建胰岛素样生长因子1(insulin growth factor 1,IGF-1)的真核细胞表达质粒,转染神经胶质瘤细胞(C6细胞),建立hIGF-1稳定表达细胞株,为进一步观察胰岛素样生长因子1基因体内转染后对脊髓损伤后神经细胞凋亡的影响打下基础.方法:实验于2004-05/09在吉林大学公共卫生学院放射生物实验室进行.用聚合酶链反应方法从人的肝细胞cDNA文库中克隆出IGF-1cDNA,然后定向插入真核细胞表达载体pcDNA3.1中,酶切电泳和基因测序鉴定插入质粒的hIGF-1基因序列;使用C6细胞株,用脂质体方法转染C6细胞.经G418筛选,形成阳性细胞克隆.继续培养4周,进行Western b1ot检测.结果:重组的真核细胞表达质粒pcDNA3.1-hIGF-1所含的IGF-1cDNA序列和插入方向均正确.Western blot检测结果证实转染的hIGF-1基因在C6细胞内成功表达.结论:实验所构建的重组真核细胞表达载体pcDNA3.1-hIGF-1能够稳定表达有活性的hIGF-1,实验结果对进一步观察脊髓损伤后胰岛素样生长因子1抑制神经细胞凋亡的作用有一定意义.
作者：付长峰；刘一；张绍坤；付士波
来源：中国临床康复 2005 年 9卷 47期
