目的:观察人骨髓间充质干细胞膜上钙离子通道的激活、失活峰值与离子通道选择性等电生理学特性,为研究干细胞在分化过程中离子通道变化奠定基础.方法:选择泸州医学院附属医院耳鼻咽喉科2004-03/2005-04获得正常发育的人捐献的骨髓标本10例.采用梯度离心法和单层贴附培养法分离,纯化,获取人骨髓间充质干细胞,选取传代第1～2代生长活性良好的人骨髓间充质干细胞进行全细胞膜片钳的记录与分析.实验采用PC-ⅡB型膜片钳放大器(华中理工大学研制),由计算机发出指令经数字量数据/模拟量数据转换经放大器输出到细胞,细胞信号由放大器放大再经模/数转换后记录到计算机,保存在数字硬盘上供分析调读,记录与分析软件为IBBClamp,采样间隔100μs.通过设定不同的实验程序,记录通道电流的幅度,激活和失活电流的峰值与时程,离子通道的选择性,Ⅰ-Ⅴ曲线.结果:①纳入10例骨髓标本,8例成功分离、培养出骨髓间充质干细胞,2例培养出现细菌污染.②原代培养的骨髓间充质干细胞形态较均一,主要为梭形,其生长特点为:24～48 h内贴壁,3～9 d进入对数生长期,9～12 d进入生长平台期.③在8例成功培养细胞中,有7例骨髓间充质干细胞可成功记录到离子通道电流,并均可记录到对Nicardipine阻断剂敏感的钙离子通道电流,该钙离子通道电流表现特
作者：杨大鉴；黄定强；胥方元
来源：中国临床康复 2006 年 10卷 25期
