目的:观察半胱氨酸蛋白酶3在局灶性脑缺血再灌注不同时间、灶周皮质的动态时空变化.方法:实验于2005-05/08在河北医科大学第二医院神经分子影像医学和神经病学实验室完成.①选择清洁级健康新西兰白兔66只,雄性,兔龄4.5～5个月,体质量(2.6±0.2)kg,采用兔大脑中动脉阻断局灶性脑缺血再灌注模型,随机分为假手术组(n=6),模型组(n=60),模型组按再灌注时间又分为6个时间点,即1 h、6 h、1 d、3 d、7 d、14 d,每个时间点10只大白兔,各时间点依方法不同又分为组织学检测组(n=5)和流式细胞术检测组(n=5).②采用免疫组化SP法检测皮质半胱氨酸蛋白酶3表达:应用Meta Morph显微图像分析系统于400倍光镜下随机观察并测量灶周皮质5个不重复视野神经细胞胞浆半胱氨酸蛋白酶3阳性表达光密度值,计算其平均数.③流式细胞术检测细胞凋亡率和灶周皮质半胱氨酸蛋白酶3的表达:经计算机分析系统,绘制细胞数DNA分布图,以二倍体峰前亚二倍体峰(凋亡峰)判定细胞凋亡,计算DNA断裂的凋亡细胞百分数(细胞凋亡率).④透射电镜取材和观察:开颅取脑后,立即取梗死灶周1 mm×1 mm×2 mm大小的标本,经过一系列处理后,在光镜下进一步确认已切到梗死灶周后,行超薄切片.醋酸铀、枸橼酸铅双重染色后,日立H-9000型透射电镜进行超微结构观察并照相.⑤
作者：杨冀萍；刘怀军；王藏海；李春岩；王黎
来源：中国临床康复 2006 年 10卷 34期
