目的:建立稳定表达人降钙素(hCT)基因的细胞株(L6),观察人降钙素基因在大鼠成肌细胞中的表达和分泌情况.方法:实验于2004-06/2005-11在河南省肿瘤病理重点实验室完成.用已构建的5'端融合小鼠抗体轻链基因lgκ的信号肽序列的人降钙素基因分泌性真核表达载体pCDNA3.0-lgκ-hCT,采用脂质体介导方法将人降钙素基因导入大鼠成肌细胞;对照组用pCDNA3.0空质粒转染.经G418筛选后,用反转录-聚合酶链反应法和免疫细胞化学法检测人降钙素基因在大鼠成肌细胞中的表达,并用放免法检测细胞培养上清液降钙素的分泌.结果:①反转录-聚合酶链反应法检测人降钙素基因的表达:反转录-聚合酶链反应扩增后,重组质粒载体转染组成肌细胞总RNA中检测到人降钙素基因的表达,而空载体转染组和未转染成肌细胞均未检测出目的基因(210 bp);β-肌动蛋白为内对照约385 bp.②免疫细胞化学法测定降钙素的表达:pCDNA3.0-lgκ-hCT转染组成肌细胞浆被黄染,提示有人降钙素表达;而空载体组胞浆染色阴性,无人降钙素表达.③细胞培养上清液中降钙素的含量:pCDNA3.0-lgκ-hCT重组载体转染组(hCT)1～10代细胞培养上清液人降钙素浓度差异无显著性(P＞0.05),明显高于同代空载体转染组(pCDNA3.0)(P＜0.001).结论:稳定表达人降钙素基因的大鼠成肌细胞株成功
作者：杨恺；李晓林；姜国忠；许建中；王义生
来源：中国组织工程研究与临床康复 2007 年 11卷 3期
