目的:观察以脂质体介导法转染的增强型绿色荧光蛋白质粒作为骨组织工程种子细胞示踪剂的可行性.方法:实验于2005-07/2006-11在南昌大学第二附属医院分子医学实验室完成.选取12个月龄中国青山羊2只作为骨髓基质干细胞供体.另取BACB/un裸鼠9只作为骨髓基质干细胞-珊瑚复合物受体.①将已转化pEGFP-N2大肠杆菌109菌种,进行质粒提取并经AvaⅡ酶切鉴定.②脂质体lipofectamine 2000介导转染羊骨髓基质干细胞.分别于转染24 h、6个月后计算荧光的转染效率.标记与未标记细胞经成骨诱导分化后,检测碱性磷酸酶活性和四环素钙结节染色,以未标记的同期细胞作对照.③将标记细胞接种于珊瑚支架,形成骨髓基质干细胞-珊瑚复合物,分别于体外培养4,7,14 d后进行电镜扫描观察.④将体外培养7 d的骨髓基质干细胞-珊瑚复合物移植于裸鼠皮下,8周后取出,荧光显微镜下进行示踪观察,苏木精-伊红染色观察组织结构.以未标记的骨髓基质干细胞-珊瑚复合物、单纯珊瑚作对照.结果:共纳入中国青山羊2只,BACB/un裸鼠9只,作为受体的9只裸鼠进入结果分析.①质粒经酶切后电泳,可见3条带,分别为445 bp,1 938 bp,2 354 bp,确定所提质粒为pEGFP-N2.②转染24 h后绿色荧光表达率35
作者：戴江华；胡琼华；戴闽；尹东；戴育成；张吉翔
来源：中国组织工程研究与临床康复 2007 年 11卷 23期
