背景:移植物主要组织相容性抗原复合物在移植排斥反应中起关键作用.用慢病毒介导的人类白细胞抗原RNA干扰技术可以降低T淋巴细胞的细胞毒作用和抗体介导的溶细胞作用,但尚未见相关体内研究报道.目的:拟用携带人类白细胞抗原A小分子干扰RNA序列的慢病毒感染人胚肺成纤维细胞,再将其移植到帕金森大鼠纹状体,观察人类白细胞抗原A表达沉默对移植排斥反应的调节.设计、时间及地点:细胞基因工程体内实验,于2005-09/2008-01在首都医科大学神经科学研究所完成.材料:清洁级12周龄雌性SD大鼠33只,用于建立帕金森动物模型.原代培养的人胚肺成纤维细胞取材于12周流产人胚胎,由北京京北医院提供.293T为贴壁依赖型成上皮样细胞.慢病毒载体系统由pSicoR,pCMV-VSV-G和psPAX2三质粒组成,为美国Addgene公司产品.携带HLA-A2 cDNA的pcDNA I/Amp-HLA质粒由比利时Ludwig肿瘤研究所Pierre van Bruggen教授惠赠.方法:以携带HLA-A2 cDNA的pcDNA I/Amp-HLA质粒为模板PCR扩增HLA-A2 cDNA编码区序列,构建人类白细胞抗原A融合蛋白表达载体pEGFP-Flag-HLA,转染293T细胞.用HLA-A2编码区序列设计小分子干扰RNA 4个待选靶点序列,分别起始于编码区的第257,350,833,251位碱基,构建表达小分子干扰RNA慢病毒载体.用带有Flag标签的人类白细胞抗
作者：徐云智；粱彩霞；赵春礼；郑德宇；段德义
来源：中国组织工程研究与临床康复 2008 年 12卷 40期
