背景:一些实验已经证明在同一载体上构建含多个基因的共表达载体,可提高转染和表达效率.目的:利用多形上皮黏蛋白(polymorphic epithelial mucin,MUC1)多肽骨架中含有许多连续重复系列,构建人MUC1重复序列串联体基因与巨噬细胞集落刺激因子(Granulocyte macrophage colony sfimulating factor,GM-CSF)基因重组的真核共表达质粒pcDNA3.1(+).MUCI-GM-CSF,并观察重组质粒存COS-7细胞中的表达.设计、时间及地点:基因重组体设计实验,于2005-09/2006-12在解放军第四军医大学动物中心实验室完成.材料:真核表达载体pcDNA3.1(+)由英国Taylor-Papadimitriou 教授惠赠.pGEM.3zf(-)-GM-CSF质粒、COS-7细胞、pUC18载体及E.coli DH5 α为自备,雌性BALB/c小鼠由解放军第四军医大学实验动物中心提供.方法:将信号肽及编码MUC1基因片段合成、合成的片断经退火等方法获得MUC1基因重复序列串联体,酶切鉴定及序列分析后,与GM-CSF基因克隆入pcDNA3.1(+)真核表达载体中,构建真核共表达质粒pcDNA3.1(+)-MUC1-GM-CSF.以重组质粒转染COS-7细胞.主要观察指标:通过间接免疫荧光法及ELISA检测目的基因的表达.结果:酶切鉴定及序列分析表明,重组质粒含有人MUC1重复序列串联体与GM-CSF的融合基因,在COS-7细胞中可检测到MUC1表达,重组质粒

作者：袁时芳；师长宏；晏伟；李南林；吕勇刚；王廷；王岭；张英起

来源：中国组织工程研究与临床康复 2008 年 12卷 42期