目的 构建长链非编码 RNA BRE-AS1 的慢病毒表达载体. 方法 利用重叠延伸PCR法构建出BRE-AS1 的全长目的片段,将全长目的片段及慢病毒载体质粒 pCDH-CMV-MCS-EF1 分别双酶切后进行连接,转化到感受态大肠杆菌后,通过DNA测序鉴定筛选出阳性菌落,提取目的质粒.利用目的质粒制备包装慢病毒,并感染肾细胞癌细胞系 OS-RC-2,分别利用荧光显微镜和荧光实时定量 PCR 检测细胞中 BRE-AS1 是否过表达. 结果 重叠延伸 PCR 得到正确的BRE-AS1 全长序列,经过双酶切、连接、转化、筛选及DNA测序,成功构建重组慢病毒载体质粒pCDH-BRE-AS1.通过荧光显微镜检测,几乎所有经过嘌呤霉素筛选的 OS-RC-2 细胞均具有绿色荧光,显示其被重组慢病毒感染;荧光实时定量PCR显示,感染了 pCDH-BRE-AS1 慢病毒的 OS-RC-2 细胞中,BRE-AS1 的表达水平上升了 38.5 倍.EdU 插入实验显示 BRE-AS1 抑制肾癌细胞的增殖.结论 本研究成功构建了BRE-AS1 的慢病毒表达载体,并证明BRE-AS1 能抑制肾癌细胞增殖.
作者：周辉；余淦；徐华；叶章群
来源：现代泌尿生殖肿瘤杂志 2018 年 10卷 5期
